Introducción

Uno de los principales problemas en el diagnóstico de la gripe es el tipo de muestra y la edad del paciente.

En general, la mayoría de las técnicas diagnósticas se han mostrado muy efectivas en los pacientes pediátricos y en los aspirados nasofaríngeos.

Sin embargo, su eficacia se ha mostrado mucho menor en la población adulta y los frotis faríngeos.

Objetivo

Se ha realizado un estudio prospectivo comparativo sobre la eficacia de una técnica de RT-PCRtr (reverse transcription polymerase chain reaction in real time ‘reacción en cadena de la polimerasa en transcripción reversa en tiempo real’) comercial, un enzimoinmunoanálisis (EIA) y el cultivo celular shell-vial (SV) en la detección de virus gripales A y B en 125 frotis faríngeos de pacientes adultos con sospecha clínica de gripe durante la temporada 2007–2008.

Material y métodos

A los frotis faríngeos se les realizó la detección antigénica gripal mediante un EIA dot-blot comercial. Para la RT-PCRtr se extrajo el ácido ribonucleico de 200μl de la muestra mediante el sistema de extracción automatizado EZ1 virus Mini Kit v2.0.

La amplificación genómica se realizó mediante una RT-PCRtr utilizando el sistema comercial automatizado OneStep RT-PCR FluA + FluB y el SmartCycler como sistema de amplificación. Las muestras se inocularon en 2 viales de la línea celular Madin-Darby de riñón canino.

El tiempo de respuesta se calculó como el transcurrido entre la llegada de la muestra hasta la obtención del resultado definitivo.

Resultados

• El sistema EIA detectó 27 muestras positivas (21,6%), la RT-PCRtr 62 muestras positivas (49,6%) y el cultivo SV 56 muestras positivas (44,8%).
• De las 62 muestras positivas, el EIA detectó 27 muestras (43,5%), la RT-PCRtr 62 muestras (100%) y el SV 56 muestras (90,3%).
• El empleo de la RT-PCRtr permitió que en el 38,4% de los adultos el diagnóstico se obtuviera el mismo día de recepción de la muestra.
• Así, el 67,2% de los resultados se obtuvieron en las primeras 24h con un tiempo de respuesta medio de 1,1 días.

Conclusión

La técnica RT-PCRtr estudiada ha mostrado una elevada sensibilidad y especificidad, en comparación con las otras técnicas, en la detección de los virus gripales en los frotis faríngeos de la población adulta.

Mediante esta técnica se puede procesar con facilidad un gran número de muestras, obtieniéndose resultados en el mismo día de la recepción de la muestra.

Palabras clave: Virus gripales. Reacción en cadena de la polimerasa en transcripción reversa en tiempo real. Enzimoinmunoanálisis. Cultivo shell-vial. Adultos.

Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010;28:95-8.

La gripe es una enfermedad infecciosa causada por virus gripales A y B que se presenta como epidemias anuales en los meses invernales. Los subtipos H3N2 y H1N1 de virus gripal A y de virus gripal B¹ causan estas epidemias en la actualidad.

Desde el punto de vista epidemiológico, es muy importante realizar un diagnóstico etiológico al inicio de cada nueva temporada epidémica, así como durante y al final de ésta, para establecer la prevalencia y las características antigénicas de las cepas gripales circulantes en ésta.

Asimismo, la existencia de los inhibidores de la exo-a-sialidasa para el tratamiento de esta entidad aconseja realizar el diagnóstico etiológico en un período no superior a las 48h tras el inicio de los síntomas^1,2.

Además de esto, el diagnóstico rápido y específico de la gripe se ha mostrado coste-efectivo en la gripe pediátrica³ así como en el control de las epidemias gripales que se producen en las residencias de ancianos⁴.

El aislamiento vírico se ha considerado como el método de referencia para el diagnóstico de gripe. Éste puede realizarse mediante inoculación en huevos embrionados o mediante cultivo celular (método convencional o en shell-vial [SV])^5,6.

Sin embargo, estos métodos presentan el inconveniente de ser lentos y laboriosos, ya que requieren de 2 a 7 días para obtener los resultados^5,6.

Debido a esto, se han desarrollado métodos de diagnóstico rápidos basados en la detección antigénica y, preferentemente, en la detección genómica⁵.

Para la detección antigénica, los métodos de enzimoinmunoanálisis (EIA) son los que han mostrado una mayor sensibilidad y especificidad.

La mayoría se realizan sobre membranas de nitrocelulosa y permiten la obtención de resultados luego de 10 a 30min de incubación^5,6,7.

Diferentes estudios han demostrado que los métodos moleculares (reacción en cadena de la polimerasa en transcripción reversa) presentan mayor sensibilidad que los métodos antigénicos y que el propio cultivo celular en el diagnóstico de las infecciones gripales^5,8,9.

La técnica de RT-PCRtr (reverse transcription polymerase chain reaction in real time ‘reacción en cadena de la polimerasa en transcripción reversa en tiempo real’) permite la obtención de resultados en menos de 4h y reduce el número de falsos positivos que puedan deberse a las contaminaciones cruzadas entre diferentes muestras^8,9.

Uno de los problemas en el diagnóstico de la gripe es el tipo de muestra utilizada y la edad del paciente.

En general, la mayoría de las técnicas diagnósticas son muy eficaces en la población pediátrica y en los aspirados nasofaríngeos¹⁰.

Sin embargo, el rendimiento de estas técnicas en la población adulta y en los frotis faríngeos es mucho más bajo^11,12.

Por esto, se ha realizado un estudio sobre la eficacia de una RT-PCRtr frente a un método de detección antigénica y del cultivo SV en la detección de virus gripales A y B en una población adulta con sospecha de gripe.

Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010;28:95-8.